بخشی از مقاله
چکیده
پروتئین OPNریک گلیکوپروتئین اسیديرمیباشد که فسفریله شده وغنیراز آسپارتیک اسید ،گلوتامیک اسید وسرین می-باشد. پروتئین رOPNردر بافت ومایعات بیولوژیکیرشامل شیر ،ادرار،کلیه و در پلاسمايرسیمن گاوهايرنروجود دارد.ردر سلولهايراپیتلیال غده پستانیر، مونوسایت هاو ماکروفاژهايرشیر نیز وجود دارد.رجایگاه ژن OPNردر وسط کروموزوم 6ر است.رژن OPNردر بانک جهانیرژن با کد شناساییرA878328رمعرفی رشده است.رطول این جایگاه 12000رجفت باز بوده و 7راگزون و6راینترون دارد و در مجموع پروتئینیربا 278راسیدآمینه را کد میکند. نه جهشرتاکنون در این ژن شناساییر
شده است.ریکیراز این جهشهادر باز شماره 10043این ژن اتفاق میافتد وباز Cرجایگزین بازT میشود.پژوهشهايرپیشین ارتباط آللC راین ژن را با صفت درصد پروتئین و درصد چربی رشیر در برخی راز نژادها اثبات نموده استع4لا. DNAرژنومیراز 100رنمونه رگاو نرهلشتاین تأییدشده در مرکز اصلاح نژاد دام کشور استخراج شد. پرایمره اباکمک نرمافزار رررOligoرطراحیرشدند. رقطعه 826رجفت بازيراز اگزون 5ر،اینترون 5رو بخشیراز اگزون 6رژن OPNرتکثیر و با استفاده ازآنزیم برشیرBsrI هضم گردید.رفراوانیرژنوتیپهايرTTر,CTروCC ربه ترتیب 34/69ر،48/62رو16/69و فراوانیرآللTوCربه ترتیب 0/59و0/41براورد شد.رجمعیت موردنظر در تعادل هاردي-روینبرگ قرار نداشت.
واژههاي کلیدي:رژنرOPN،رپروتئین OPN،رچندشکلی، گاوهلشتاینرایران.
مقدمه
در پژوهشهايرپیشین، جایگاه صفات کمیررويرکروموزوم هايرمتعدد بررسیرشده و ارتباط برخیراز آنها با صفات تولید شیر به اثبات رسیده است ع5لا.کروموزوم شماره6رشامل بیشترین تعداد از این جایگاه صفات کمیرگزارش شده میباشد.عر 5 و9لا ر .یکیراز مهمتریناینژنها، OPN رمیباشد که استئوپنتین ررا کد میکند. رچندین مطالعهاز اسکنژنومیر،جایگاه صفات کمیمؤثر بر صفات رتولید شیر روي رکروموزوم 6 رنزدیک به جایگاه ژنOPN ررا شناساییکردندع6و11لا. رنقش پروتئین OPNربه نوع سلولیرکه در آن بیان شده بستگیردارد از جمله نقش هايرآن فعالسازيرسلولهايT، تکثیر و تولیدسیگنال هايرداخل سلولی، تنظیم تشکیل و شکلیابیرمجدد بافتهايرغنیراز موادرمعدنی,رمحرك ماکروفاژها در پاسخ به عفونت واثرات متقابل با یونهايرمیباشدع3رلا.
غلظتراستئوپنتین در شیر گاو 8mg/Lرمیباشدع1لا.OPNریک ژن کاندیدايرموثر منطقه QTLراز BTA6است که این منطقه جایگاه تعداد زیاديراز QTLsرمرتبط با شیر استع8لا.ژن هاي رOPN ،STAT1 وUTMP رارتباط معنیداري ربا ترکیبات شیر وصفات سلامتی ردر گاو شیرير دارندع8لا.ارتباط بین واریتههايرژن OPNرودرصد پروتئین در جمعیتگاوهايرهلشتاین شمال امریکا مشاهدهشدع8لا.ردرچندین مطالعه مشخص شد ارتباط معنیداري ربین نشانگرهاي رریزماهواره ردرمنطقه ژن OPN با درصد پروتین شیر ،درصدچربی، مقدارشیر،پروتئینو چربیرروجود داردع4لا.ربا توجه به حضورپروتئین OPNردر شیر و بیان آن در سلولهاير اپیتلیال غده پستانیروبا توجهبه ارتباط بین هاپلوتایپهايرمختلف این ژن با برخیرصفات تولید شیر در بعضیراز نژادها، ضروريراست که چند شکلیرژن OPNردر گاوهايرهلشتاین ایران مورد بررسیرقرار گیردع4لا.
موادرورروشها
تعداد 100رنمونه اسپرم منجمد مربوط به گاوهايرنر تأیید شده مرکز اصلاح نژاد دام کشور برايراستخراج DNAربا کیت High Pure PCR Templateرشرکت ROCHEرهمراه با بافر لیزکنندهرDTTرو همجنین ازروروشراستخراجرنمکیتعمیمر-یافته استفاده شد.ارزیابی ر کمیت رDNA ربا استفاده از دستگاهاسپکتوفتومتر رانجام رشد رو ربراي رارزیابی کیفیت DNA، ر5ر ماکرولیتر DNAراستخراج شده بر رويرژل آگارز یک درصد الکتروفورز شد.رآغازگرها توسط نرمافزارOligoرطراحیرور برايرتکثیررقطعهرموردرنظراستفادهرگردید.رطولقطعهتکثیررشدهر826رجفتربازربود که شاملراگزون 5،اینترونر5رو بخشیراز اگزونر6رژن OPNربود.رتوالیرآغازگرهايرطراحیرشدهربه شرح زیر بود:
حجم نهاییرمواد در 20رمیکرولیتر عبارتنداز 10:رمیکرولیتر بافر با غلظت x10، 2میکرولیترر Cora Load با غلظتر10X، 1میکرولیتر از هریک از آغازگرها با غلظت 10پیکومول و 5رمیکرولیتر DNA با غلظت50ر نانوگرم بود.محصول PCRرروير ژل آگارز 2ردرصد الکتروفورز شدندو نتیجه در دستگاه ژل داکیومنت مورد بررسیرقرار گرفت .ربرايرهضم آنزیمی0/7ر واحد از آنزیم BsrIعBseNIلااستفاده شد . رنمونهها به مدت 16 رساعت در درجه حرارت 65 ردرجه سیلسیوس قرار گرفتند.برايرمشاهده ژنوتیپهايرمختلف از ژل آگارز 2درصد استفاه شد .فراوانیرآللها توسط نرمافزار ژنتیک جمعیت عPop Geneلانسخه 32محاسبه شد.
نتایج وبحث
درشکل1رتکثیر قطعه 826رجفت بازمشاهده میشود.رنشانگر اندازه استفاده شده در کنار محصولات PCRرصحت تکثیر قطعه موردنظر را تأیید کرد.رآنزیم برشدهنده BsrIدر توالیرکه جهش اتفاق افتاده باشد سایت برشیررا شناساییرو سبب ایجاد دو قطعه ر368رو 458رجفت بازيرشدعشکل2لا.رفراوانیرآللهايرTورCربه ترتیب 0/59و0/41رمحاسبه شد.رفراوانیر ژنوتیپر,TTرCTرو CCربه ترتیب 34/69ر،48/62رو16/69ربراورد شد.ر نتایج آزمون کايرمربع نشان داد نمونه مورد مطالعه در تعادل هارديروینبرگ نمیباشدعp<0/05لا.ریکیراز دلایل عدم تعادل را میتوان به این صورت گزارش نمود که گاوهاير نر مطالعه تحت تأثیر انتخاب بودهاند.رر با توجه به اثراین ژن بر تغییرات صفات تولیدشیر میتوان فراوانیرآللیراین ژن را در جهت اهداف اصلاحرنژاد تغییردادع4لا.در مطالعهايرکه به منظور بررسی راثر واریتههايرOPN ربرصفات تولیدشیر رويرجمعیت گله گاوهاي رتعاونیر امریکاو جمعیت گاوهايردانشگاه ویسکانسین انجامشد، فراوانیرآللی0/52 - -0/02 - Cدر گلههايرتعاونیرو فراوانیرآللیرCر 0/49روTر0/51ردر گله دانشگاه ویسکانسین براورد شد.
بنابراین به نظر میرسد فراوانیرآللهايرOPNربه طور یکنواخت در هر دو جمعیت توزیع شده باشندعر4 رلا.در یک تحقیق که هدف تعیین ژنوتیپ وفراوانیرآللیرژنهايرOPN، PRLر وPIT-1 ردر گاوهايرقرمز جنوب وشرق ترکیه انجام شد.راز مجموع 40رگاو منطقه جنوب Antolianر،22گاو ژنوتیپ TTر,ر 15رگاو ژنوتیپCTرو3رگاو ژنوتیپ CCررا نشان دادندوفراوانیرآللهايTوCربه ترتیب /74ر0و 0/26ربراورد شد.رهمچنین از مجموع 40رگاو منطقه شرق Antolianر،27رگاو ژنوتیپ TTر,ر13رگاو ژنوتیپCTروهیچ گاويرژنوتیپ CCررا نشان دادندوفراوانیرآللهايTوCربه ترتیب 0/84رو 0/16ربراورد شد عر7رلا.نتایج نشان دادکه نژادهايرجنوب وشرق Antolianرر فراوانیرآلل Cرژن OPNرکه مرتبط با صقات تولید شیر میباشد کمتر از نژادگاوهايراروپاییربا تولید شیر بالامیباشدع7رلا.
