بخشی از مقاله
چکیده:
لاکتو باسیل ها از مهمترین میکرواورگانیسم های پروبیوتیک بوده. لاکتو باسیل ها، باسیل گرم مثبت، بدون حرکت، بدون اسپور وکاتالاز منفی هستند؛ و قند های مختلف را به لاکتات و استات تبدیل می کنند .همچنین لاکتوباسیلوس ها دارای اثر آنتاگونی ستی خوبی بر ا ستافیلوکوک اورئوس ، ا شری شیا کلی و آئروموناس هیدروفیلا ه ستند. پروبیوتیکها با ا ستقراردر محیط روده می توانند تعادل میکروبی رادرجهت سلامت و سودمندی آنها افزایش دهند. علاوه بر این پروبیوتیکها با سنتز برخی مواد ضروری، نقش مهمی در حفظ سلامتی فرد مصرف کننده ایفا می کنند. برای شناسایی باکتری از روش مولکولی انجام شد که با استفاده از آغاز گر های طراحی شده از ژن16S rRNA برای انجام واکنش PCR، برای تشخیص جنس های لاکتو باسیل ها، مورد استفاده قرار می گیرد. در این تحقیق از 50 ماهی نمونه برداری ازروده صورت گرفت که در این به میزان 28 نمونه مثبت لاکتو باسیلوس کازئی بعد از رنگ آمیزی و تست PCRشناسایی و جدا گردید.
کلمات کلیدی: لاکتوباسیل کازئی، ماهی کپور نقره ای، پروبیوتیک
مقدمه
ماهی کپور نقرهای - فیتوفاک - با نام علمی - Hypophthalmichthysmolitrix - این ماهی بومی چین و شرق سیبری است و برای پرورش ماهی به نقاط دیگر دنیا معرفی شده است. محل اصلی زندگی این ماهی رودخانه آمور است. ماهیان کپور نقرهای هنگامی که درجه آب 21-23 درجه سانتی گراد و رودخانه در حال سیلاب و گل آلودگی باشد به صورت دسته جمعی اقدام به تخم ریزی میکنند. در صورتی که آب ساکن با شد عمل تخم ریزی به هیچ عنوان صورت نمیگیرد، از اینرو هنگام تکثیر م صنوعی این ماهی، تنها وسیله برای القا تخم ریزی آن، تزریق هورمون هیپوفیز به این ماهی است. تعداد تخمها 200000-1500000 عدد بوده، به قطر 0 7-1میلیمتر میبا شند. پس از 1 5روزتخمها شکفته شده ولاروهاپس ازا ستفاده ازک سیه زرده واتمام آن ازجلبکهای چندمیکرونی ودرصد ناچیزی از پلانکتونهای جانوری تغذیه میکنند، ازاین رو این ماهی به نام فیتوفاگ هم خوانده میشود .
ماهیان نر کپور نقرهای در زیستگاه خود در 4 -6 سالگی و مادهها در 5-6 سالگی بالغ میشوند. تکثیر و پرورش این ماهیان به همراه ماهی علفخوار، ماهی کپور و ماهی کپور سر گنده در بیشتر کشورها از رونق چشمگیری برخوردار است. در ایران نیز پرورش این ماهی به علت تغذیه آن از پلانکتونهای گیاهی که از تولیدات طبیعی استخر هاست از اهمیت ویژهای برخوردار است. این ماهیان خواب زمستانی دارند؛ به صدا حساسند و جذب صدا میشوند و تا 1 5متر از آب بیرون میپرند. هر منطقه از بدن جانوران دارای مجموعهای منحصر به فرد از میکروارگانیسمها است که به عنوان فلور نرمال در قسمتهای مختلف بدن مستقر هستند.
که نقش مهمی در حفظ سلامتی و بهدا شت فرد دارد. عملکردهای این میکروارگانی سمها ب سیار متنوع میبا شد که از جمله آنها: حفظ تعادل سی ستم ایمنی بدن و فعالیتهای متابولیک، کاهش خطر ابتلا به سرطان و کمک به فعالیتهای گوارشی و جلوگیری از دیابت و چاقی و.... میباشند. فلور واژن ان سان شامل مجموعه میکروبی پویا و پیچیدهای ا ست که در آن همزی ستی میکروارگانی سمهای مختلف موجب حفظ سلامت فرد میشود. در مطالعات متعدد مشخص شده که لاکتوباسیلها در روده جانوران سالم وجود دارند. لاکتوباسیلها عضو اصلی باکتری های اسید لاکتیک هستند. - لطفی و همکاران، - - 1389ایزدی و همکاران، - 1390 لاکتوباسیلها مهمترین میکرواورگانیسم های پروبیوتیک بوده، که شامل باکتری های متنوعی از لاکتوباسیلها و Bifidobacterium می باشد - مارکو و همکاران . - 2006 لاکتو باسیل ها، باسیل گرم مثبت، بدون حرکت، بدون اسپور،کاتالاز منفی، و قند های مختلف را به لاکتات و استات تبدیل می کنند . - Gatesoupe, 2008 -
اکثر لاکتوباسیل ها بی خطر بوده و ممکن است آنتاگونیست باکتری های پاتوژن باشد - Jean Guy et - al,2014 - محمدیان وهمکاران، - 1393 - میر داوودی و همکاران،. - 1390 اثرات ضد میکروبی برخی از لاکتوباسیل ها تا کنون شناسایی شده است. برای مثال لاکتوباسیلوس ها توانایی مهار رشد هلیکوباکتر پیلوری را دارا می باشد که می توان از این باکتری به عنوان ارگانیسم زنده پروبیوتیک در تغذیه استفاده نمود تا از خطر پاتوژن هلیکوباکتر پیلوری کاست. همچنین لاکتوباسیلوس کازه ای و لاکتوبا سیلوس کازئی دارای اثر آنتاگونی ستی خوبی بر ا ستافیلوکوک اورئوس و ا شری شیا کلی وآئرو موناس هیدروفیلا ه ستند - صالحی، - - 1392اندانی و همکاران،. - 1390 مهمترین فعالیت پروبیوتیک ها در لوله گوارش ماهی از طریق بهبود جذب غذا با تولید آنزیم های خارج سلولی و ویتامین ها است.
نتایج آزمایشات مختلف نشان داده شده که رشد، درصد افزایش وزن، سرعت رشد ویژه، راندمان م صرف خوراک، ن سبت راندمان پروتئین و افزایش پروتئین در ماهی های تغذیه شده با پروبیوتیک بی شتر بوده ا ست. تاثیر مهم دیگر پروبیوتیک ها کاهش میزان بروز و شیوع بیماری ها، تقویت سیستم ایمنی و فعالیت های ضد ویروسی است. - Behnsen . - et al, 2013 تعیین توالی DNA با استفاده از پرایمر های مشخص شده و ازطریق PCR انجام می گیرد .برای شناسایی باکتری از روش مولکولی انجام می شود که با استفاده از آغاز گر های طراحی شده از ژن16S rRNA برای انجامواکنش PCR ، برای تشخیص جنس های لاکتو باسیل ها، مورد استفاده قرار می گیرد - . - Nour, 1998 همچنین ازآغاز گرهای مخصوص جنس لاکتو باسیل بعد از توالی یابی، که در بانک ژن NCBI ثبت شده می باشد؛ استفاده خواهدشد. و بعد از آن پرایمر مخصوص باکتری طراحی می گردد.
مواد و روشها
به تعداد 50 عدد از هر نمونه را به صورت مساوی انتخاب می نماییم. ونمونه ها از مراکز پرورش ماهی در نقاط مختلف جمع آوری می گردد. سپس نمونه گیری از روده ماهی انجام گرفته و در محیط کشت MRSبراث، کشت داده و در جار بی هوازی با شرایط میکروائروفیلیک قرار میدهیم و بعد از مدت زمان انکوبه، به بررسی باکتریها در صورت وجود کدورت می پردازیم که دوباره از محیط کشت رشد یافته نمونه برداشته و در محیط MRSآگار کشت می دهیم بعد از زمان انکوبه کلنی مورد نظر را برداشته و رنگ آمیزی گرم انجام می دهیم و در صورت مثبت بودن که با سیل گرم مثبت می با شد و ت ست کاتالاز، اک سیداز، ت ست حرکت و ت ست اندول انجام داده در صورت منفی بودن دوباره از کلنی مورد نظر برداشته و دوباره برای انجام عمل PCRکشت می دهیم. بعد از عمل PCRو برای تایید ژن، از الکتروفورز ا ستفاده می نماییم تا باند های اخت صا صی را با توجه به مارکر م شاهده نماییم که با پیدا شدن باند مورد نظر با توجه به پروتکل، نمونه های مثبت - که دارای جفت باز مورد نظر و یا همان ژن اختصاصی - مشخص و شناسایی می شود. از بین 50 نمونه به تعداد 28 نمونه مثبت L. acidophilus گزارش گردید. بررسی آماری: پس از مشخص شدن نوع لاکتوبا سیلها تو سط نرمافزار SPSS برر سی آماری انجام شد. ون شان داده شد که بین جمعیت نمونه های مثبت و کل نمونه های جمع آوری شده ارتباط معنی دار - p<0.05 - وجود دارد.
نتایج
جدول :1 ترکیب اصلی لاکتوباسیلوسهای نمونههای 50 ماهی مورد مطالعه قرار گرفت و نتایج در جدول زیر ارایه شده است:
بحث
در بررسیهای انجام شده در کشورهای مختلف، Diazو همکاران در سال 2013 به بررسی و شناسایی گونه های پروبیوتیکی لاکتو باسیل از دولفین پرداختند. و آنرا از دستگاه گوارش دولفین جدا کردند. فهمیدند که همزیستی بین باکتریهای لاکتوباسیل و دستگاه گوارش دولفین وجود دارد. و همچنین جعفریان و همکاران در سال 1388 بر روی تأثیر پروبیوتیکها روی لارو ماهی قزل آلای رنگین کمان پرداختند. که به غذای ماهی اضافه نمودند و نتیجه، این آزمایش نشان دادکه باسیلوسهای پروبیوتیکی به طورعالی پارامترهای رشد را در لاروهای ماهی قزل آلا افزایش دادند. همچنین نورفات و همکاران در سال 2010 به بررسی اثرات آنتاگونیسمی
