بخشی از مقاله
چکیده
مقدمه وهدف : حامل های ABC خانواده بزرگی از پروتئین حامل غشایی اند که با استفاده از انرژی هیدرولیز ATP طیف گسترده ای از سوبستراها را در غشا های بیولوژیکی جابجا کرده و در فرایند انتقال معکوس کلسترول نقش بسزایی دارند. پروتئین ABCG5 یکی از اعضای این خانواده بزرگ است که نقشی مهمی در این فرایند ایفا می کند. پسته ی وحشی - بنه - گیاهی از خانواده آناکاردیاسه دارای خواص ضدالتهابی و ضداکسایشی است. هدف از پژوهش حاضر بررسی اثر هشت هفته تمرین استقامتی با و بدون عصاره ی بنه بر میزان بیان ژن ABCG5 کبد است.
این پروتئین ها در حمل و نقل مواد مختلفی مثل اسید های آمینه، ذرات ارگانیک، پپتیدها، قندها، لیپوپلی ساکلریدها، بسیاری از داروها و پروتئین ها بسیار ضروری و مهم هستند. نشان داده شده است که ABCG5 انتقالدهنده اصلی ترشح کلسترول صفراوی در نظر گرفته می شود. مطالعه ی حاضر قصد دارد نقش دو عامل ورزش و مکمل غذایی بنه را در میزان بیان ژن ABCG5 بافت کبد را بررسی کند.
مواد و روش ها: در این پژوهش20 سر موش صحرایی - شش تا هشت هفته ای و125-135گرم - به طورتصادفی به دو گروه کنترل 10 - سر - و تمرین 10 - سر - تقسیم شدند. متعاقبا هر گروه به زیر مجموعه-های سالین و بنه تقسیم شدند.
گروه های تمرینی به مدت هشت هفته - پنج روزدرهفته، به مدت 60 دقیقه وسرعت 25 متربردقیقه باشیب صفر - به تمرین پرداختند. عصاره ی بنه وسالین نیزبه مدت چهارهفته به شکل اورالی به آزمودنی ها خورانده شد. پس از تخلیص RNA و انجام PCR ، اندازه گیری کمی بیان ژن ABCG5 توسط Real-time PCR انجام شد. نتایج: نتایج این پژوهش نشان داد پس از هشت هفته تمرین استقامتی میزان تغییرات در بیان ژن ABCG5 در گروه سالین تمرین به طور معنی داری - - P<0/001 بالاتر از گروه های دیگر بوده است.
همچنین میزان بیان ژن ABCG5 در گروه های بنه - - P<0/001 به طور معنی داری کمتر از گروه های سالین همتا بوده است. نتیجه گیری: پژوهش حاضر افزایش در بیان ژن ABCG5 را در گروه تمرینی نشان داد. همچنین کاهش معنی دار بیان ژن ABCG5در گروه های بنه در مقابل سالین مشاهده شد که احتمال می رود کاهش ناقل های ABC به علت اسید چرب بالای بنه باشد.
مقدمه
حامل های ABC خانواده بزرگی از پروتئین حامل غشایی اند که با استفاده از انرژی هیدرولیز ATP طیف گسترده ای از سوبستراها را در غشا های بیولوژیکی جابجا کرده و در فرایند انتقال معکوس کلسترول نقش بسزایی دارند. فرایند انتقال معکوس کلسترول - 1RCT - توسط ناقلهای 2ABC میانجیگری میشود.3ABCG یکی از خانوادههای بزرگ این مجموعه است. همهی ABCG ها بهجز G2 نقش مهمی در فرایند انتقال معکوس کلسترول بازی میکنند.
این پروتئینها در حمل و نقل مواد مختلفی مثل اسیدهای آمینه، ذرات ارگانیک،
پپتیدها، قندها، لیپوپلیساکلریدها، بسیاری از داروها و پروتئینها بسیار ضروری و مهم هستند - بایدینر و همکاران. - 2005 4 نشان داده شده است که ABCG5 وABCG8 انتقالدهنده اصلی ترشح کلسترول صفراوی در نظر گرفته می شود - ولوشینا و همکاران . - 20115 مطالعات پیشین نشان داده است کهABCG5 بر روی غشای آپیکال انتروسیت و کبدی بیان میشوند، جایی که جذب رودهای را محدود و ترشح استرول را افزایش می دهند - ولوشینا و همکاران - . در سال های اخیر پژوهش های متعددی روی خانواده ABC انجام شده است.
قنبرینیاکی و همکاران نشان دادند که شش هفته تمرین هوازی - با شدت 25 متر در دقیقه به مدت 90 دقیقه، پنج روز در هفته - ،باعث افزایش بیان ژن ABCA1 کبد موشهای صحرایی شد - قنبری نیاکی و همکاران - 2007؛ همچنین سطوح پلاسمایی HDLC ، - Pre-HDL و لسیتین کلسترول اسیل ترانسفراز 6بهطور معنیداری افزایش یافت. خبازیان و همکاران نشان دادند که فعالیت ورزشی استقامتی 12 هفتهای با شدت مشابه باعث افزایش بیان ژن ABCA1 روده در موشهای صحرایی شده است - خبازیان و همکاران . - 2009 همچنین نشان داده شده است که هشت هفته تمرین ورزشی با شدت پایین 1000 - قدم راه رفتن در روز - به طور معنیداری بیان ژن ABCA1 و ABCG1 را افزایش داده است
نقش گیاهان مختلف دارویی در کاهش کلسترول خون و کاهش بیماری های قلبی ، از جمله بیماری عروق کرونر به خوبی شناخته شده است. بیش از دو هزار سال پیش، پزشکان شروع به استفاده از گیاهان برای درمان چاقی نمودند، برخی از این گیاهان شامل گردو ، پسته و سیلی مارین می باشد. طبق پژوهشی که تاثیر سیلیمارین را بر برخی ناقل-های ABC بیان کرده است این گیاه تاثیر مثبتی بر روی ترنسپورترهای ABC داشته است. همچنین با کاهش جذب کلسترول از روده تاثیر مثبتی بر نیمرخ لیپوپروتئینی پلاسما داشته است - وسرا و همکاران . - 20118 پستهی وحشی - 9بنه - دانهای روغنی سرشار از آنتی اکسیدان و اسید چرب، گیاهی از خانواده آناکاردیاسه 10است. نشان داده شده است که عصارهی این گیاه حاوی ترکیبات ضداکسایشی است. مطالعهی حاضر قصد دارد نقش دو عامل ورزش و مکمل غذایی بنه را در میزان بیان ژن ABCG5 بافت کبد را بررسی کند.
روش تحقیق
میوهی رسیده و تازهی بنه پس از جمعآوری از شهرستان هرات واقع در استان یزد و تایید آن توسط بخش گیاه شناسی دانشگاه مازندران در سایه خشک گردید. هر ده گرم پودر میوهی بنه با 150 میلی لیتر آب، به مدت 45 دقیقه جوشانده و سپس دو بار از کاغذ صافی شماره چهار واتمن عبورداده شد. در پژوهش حاضر 20 سر، موش صحرایی ماده نژاد ویستار با وزن 125-135 گرم، از انستیتو پاستور آمل تهیه گردید.
حیوانات مورد آزمایش در قفسهای پلی کربنات ساخت شرکت رازی راد، در دمای محیط با22 2 درجه سانتیگراد، چرخه روشنایی به تاریکی 12:12 ساعت و رطوبت هوای50 5 درصد با تهویهی مناسب نگهداری شدند. غذای آزمودنیها، تولید شرکت خوراک دام بهپرور کرج بود که به ازای هر 100 گرم از وزن هر موش ده گرم غذا و آب مورد نیاز نیز به صورت آزاد در اختیار آنها قرار داده شد. حیوانات پس از آشنایی با محیط به دو گروه کنترل - 10سر موش - و تمرین - 10سر موش - تقسیم شدند. موشهای گروه کنترل در تمامی طول پژوهش در هیچ تمرینی شرکت داده نشدند. گروههای تمرینی به مدت هشت هفته - پنج روز در هفته، به مدت 60 دقیقه و سرعت 25 متر بر دقیقه با شیب صفر - به تمرین پرداختند
گروههای بنه، عصارهی بنه را به ازای 7/5 میکرولیتر به ازای هر گرم وزن به مدت چهار هفته از طریق گاواژ دریافت کردند. گروههای سالین نیز همزمان همین مقدار سالین را مصرف نمودند.حیوانات 72 ساعت پس از آخرین جلسه تمرین بوسیلهی ترکیبی از کتامین - 30-50kg/mg - 1 و زایلازین - 3-5kg/mg - 2 بیهوش شدند و بافت کبد بلافاصله با نیتروژن مایع منجمد شد. تخلیص RNA بر طبق دستورالعمل کیت مخصوص - AccuZol, Bioneer, Cat.No: k3090 - انجام شد. سنتز cDNA بر طبق دستورالعمل شرکت سازندهی کیت - - AccuPower RT PreMix, Bioneer, Cat.No: k2041-B انجام شد.
برای اندازهگیری کمی بیان ژن نسبی هر نمونه، 7/5 میکرولیتر مستر سایبرگرین کیاژن - Germany,GmbH,Qiagen, Cat. No. 204052 - را با پنج میکرولیتر آب RNase Free مخلوط و یک میکرولیتر پرایمر رفت3 و یک میکرولیتر پرایمر برگشت4 به همراه 0/5 میکرولیتر از cDNA اضافه شد. سپس تیوپها در دستگاه 95 - Real-time PCR درجه سانتیگراد برای پنج دقیقه و پس از آن 30-45 سایکل 90 درجه سانتیگرادی به مدت پنج ثانیه و به دنبال آن در 60 درجه سانتیگراد به مدت 10 ثانیه - قرارگرفتند.
جدول .1 پرایمرهای اختصاصی ABCG5و-actin
تعیین کمیت Real-time به وسیلهی اندازهگیری افزایش تشعشع فلورسنس، در نتیجهی اتصال رنگ سایبرگرین به DNA دو رشتهای در انتهای هر چرخهی تکثیر انجام شد و مقدار آن از طریق فرمول 2^- &7 محاسبه شد. آزمونهای آماری با استفاده از نرم افزار SPSS نسخهی 19 انجام گرفت. آزمون گلموگرو اسمیرنوف نشان داد که توزیع دادهها به شکل نرمال هستند. سپس از دادهها آنالیز واریانس یکطرفه گرفته شد و برای یافتن اختلاف معنیداری بین گروهی از آزمون تعقیبی LSD در سطح معنیداری - - P<0/001 استفاده شد.
